Staphylococcus aureus culture

Staphylococcus aureus culture

Staphylococcus aureus culture

Um die Wachstumseigenschaften von Mikroorganismen in verschiedenen Differential, selektiv und angereichert Medien unterscheiden.

Ein großer Teil der Studie von Mikroorganismen, hängt von seiner Fähigkeit, im Labor zu wachsen, und dies ist nur möglich, wenn geeignete Kulturmedien für das Wachstum des Mikroorganismus zur Verfügung stehen. Ein Kulturmedium wird als Feststoff oder flüssige Zubereitung für das Wachstum, den Transport verwendet definiert und Lagerung von Mikroorganismen. Die effektive Kulturmedium muss enthalten alle für das Wachstum des Mikroorganismus benötigten Nährstoffe.

Fachmedien für die Isolierung und Identifizierung von Mikroorganismen, die Prüfung der Antibiotika-Empfindlichkeiten, die Analyse von Wasser und Lebensmitteln, industriellen Mikrobiologie und andere Aktivitäten weithin eingesetzt. Obwohl alle Mikroorganismen Energiequellen benötigen, Stickstoff, Kohlenstoff, Phosphor, Schwefel und verschiedenen Mineralien, wird die genaue Zusammensetzung eines zufriedenstellenden Mediums auf die Spezies verlassen einem zu identifizieren und zu kultivieren, da versucht Nahrungsbedarf so stark unter den Mikroorganismen variieren.

Die Kenntnis der normalen Lebensraum des Mikroorganismus ist oft nützlich, in einem geeigneten Kulturmedium ausgewählt, weil seine Nährstoffbedarf seiner natürlichen Umgebung widerspiegeln. Ein Medium wird verwendet, um bestimmte Mikroorganismen zu wählen und zu wachsen oder eine bestimmte Art Identifizierung zu helfen. In diesen Fällen hängt die Funktion des Mediums auch von seiner Zusammensetzung. Zusätzlich zur notwendigen Nährstoffe für das Wachstum aller Bakterien, Spezialmedien enthalten ein oder mehrere chemische Verbindungen, die für ihre funktionellen Spezifität wichtig sind.

Diese beinhalten: Selektiv, Differential und Enriched Medien.

Selektivmedien :

Selektive Medien ermöglicht das Wachstum von bestimmten Art von Organismen, während das Wachstum von anderen Organismen zu hemmen. Diese Selektivität wird auf verschiedene Weise erreicht. Zum Beispiel Organismen, die die Fähigkeit haben, einen bestimmten Zucker zu verwenden sind, indem sie dieses bestimmte Zucker die einzige Kohlenstoffquelle in dem Medium für das Wachstum des Mikroorganismus leicht gescreent. Wie weise kann die selektive Inhibierung bestimmter Arten von Mikroorganismen durch Zugabe von bestimmten Farbstoffen, Antibiotika, Salze oder spezifische Inhibitoren untersucht werden, die den Metabolismus oder die Enzymsysteme der Organismen beeinflussen. Beispielsweise Medien Kaliumtellurit enthält, Natriumazid oder Thalliumacetat in verschiedenen Konzentrationen von 0,1-0,5 g / l das Wachstum aller Gram-negativen Bakterien hemmen. mit dem Antibiotikum Penicillin-Konzentration 5-50 Einheiten / ml oder Kristallviolett 2 mg / l hemmen das Wachstum von Gram-positiven Bakterien ergänzten Medium. Tellurit-Agar wird verwendet für Gram-positive Organismen auszuwählen, und Nähragar mit dem Antibiotikum Penicillin ergänzt kann verwendet werden für das Wachstum von Gram-negativen Organismen auszuwählen.

Z.B. Mannit-Salz-Agar, Hektoen darmlöslichen Agar (HE), Phenylethylalkohol Agar

Differentialmedien:

Differentialmedien zum Differenzieren eng verwandten Organismen oder Gruppen von Organismen weit verbreitet. Wegen der Anwesenheit bestimmter Farbstoffe oder Chemikalien in den Medien, werden die Organismen gewisse charakteristische Änderungen oder Wachstumsmuster erzeugen, die für die Identifizierung oder die Differenzierung von Mikroorganismen verwendet werden.

Z.B. Mac Conkey (MCK) Agar, Eosin Methylenblau (EMB) Agar

Enriched media :

Angereichert Medien sind Medien, die mit sehr nahrhaftes Materialien wie Blut, Serum oder Hefeextrakt zum Zweck des Anbaus von anspruchsvollen Organismen ergänzt wurden.

Z.B. Blut-Agar, Schokolade-Agar

Einen Teil der Spezialmedien sind wie folgt:

1. Mannit-Salz-Agar (MSA):

Mannit-Salz-Agar ist sowohl eine selektive und differenzierte Medien zur Isolierung von pathogenen verwendet Staphylokokken von Mischkulturen.

Komponenten:

  • 7,5% NaCl — Wählt für Arten von Staphylococcus. Diese Salzkonzentration ist zu hoch für die meisten anderen Bakterien zu widerstehen, und. daher deren Wachstum hemmt.
  • Mannit — Alkohol der Kohlenhydrat Mannose. Mannitol Fermentation bildet Säure Endprodukte, die das Medium gelb. Gelb zeigt positive Mannit und keine Farbänderung zeigt an Mannit negativ.
  • Phenolrot pH-Indikator — Gelb in saurem pH-Wert (die gleiche Anzeige, die in Phenolrot Kohlehydratgärung Brühen verwendet wird).

Abbildung 1. Mannit-Salz-Agar

Auf MSA, nur pathogene Staphylococcus aureus produziert kleine von gelben Zonen umgeben Kolonien. Der Grund für diese Farbänderung ist, dass S. aureus haben die Fähigkeit, die Mannit zu fermentieren, eine Säure produzieren, die wiederum die Anzeigefarbe von rot nach gelb ändert. Das Wachstum von anderen Bakterienarten ist in der Regel unterdrückt. Dieses Wachstum unterscheidet S.aureus von S. epidermidis. die bildet Kolonien mit roten Zonen oder beiden Zonen.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser

2. MacConkey des Agar (MAC):

MacConkey des Agar ist sowohl eine selektive und differenzierte Medien; es ist selektiv für gramnegative Bakterien und können diese Bakterien zu unterscheiden, die die Fähigkeit Laktose zu fermentieren haben.

Komponenten:

  • Gallensalz — Hemmt die meisten Gram-positive Bakterien, ausgenommen Enterococcus und einige Arten von Staphylococcus d.h. Staphylococcus aureus.
  • Kristallviolett-Farbstoff — Hemmt bestimmte Gram-positive Bakterien, also die Auswahl für Gram Negative.
  • Laktose — Einige Bakterien können Laktose Säure-End-Produkte gären, andere nicht.
  • PH-neutral rote Anzeige — Stains Mikroben gärenden Laktose

* Hot pink in saurem pH-Wert
* Stieg im neutralen pH-Wert
* In alkalischen pH-tan

  • Pepton — eine Quelle von Proteinen, Aminosäuren für mikrobielles Wachstum.

Figur 2. MacConkey s Agar

Durch die zur Verfügung stehende Lactose im Medium verwendet wird, Lac + (Lactose positiv) Bakterien wie Escherichia coli, Enterobacter und Klebsiella wird Säure in dem Medium zu produzieren, das unter 6,8 der pH des Agars senkt und führt zum Auftreten von roten oder rosa Kolonien. Die Gallensalze in dem Medium, in der unmittelbaren Nachbarschaft der Kolonie auszufallen, wodurch das Medium, um die Kolonie umgebenden trübes Aussehen zu werden. Nicht Laktose fermentierenden Bakterien wie, Proteusarten ,Salmonellen. Pseudomonas aeruginosa und Shigella kann nicht Laktose in dem Medium zu nutzen, und stattdessen Pepton verwenden. Dies resultiert in der Bildung von Ammoniak, die den pH des Agars erhöht, und führt zu der Bildung von weißen oder farblosen Kolonien in der Platte. Aber in einigen Fällen kann sie auch mit dunklen Zentren braun aussehen golden. Sie sind meist kreisförmige Kolonien und angeordnet ist zufällig.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser

3. Eosin Methylenblau (EMB) Agar (Levine):

Eosin-Methylenblau-Agar (EMB) ist sowohl eine selektive und Differentialmedium zum Nachweis und zur Isolierung von gramnegative Darmkeime verwendet.

Komponenten:

  • Laktose — Ein Disaccharid, das von einigen bakteriellen Enzymen fermentiert werden können, um saure Endprodukte herzustellen.
  • Eosin und Methylenblau — Das sind Farbstoffe, die das Wachstum der meisten Gram-positiven Bakterien hemmen. Sie reagieren auch mit jeder sauren Produkten aus Lactosefermentation führte die Kolonien zu färben.

Abbildung 3: nicht geimpfte EMB-Agar-Platte

Säureproduktion aus Lactose Fermentation bewirkt eine Ausfällung der Farbstoffe auf der Oberfläche der Kolonie in verschiedenen Farben führt.

  • Große Mengen an Säure → grün metallischen Glanz
  • Kleine Mengen an Säure → rosa
  • Keine Gärung → farblos

Enterobacter aerogenes produziert große Kolonien, die sich um dunkle Zentren rosa-to-buff. Escherichia coli produzieren kleine, dunkle Kolonien mit einem grünen metallischen Glanz. Pseudomonas, Proteus, Salmonella und Shigella sp produziert farblose Kolonien, weil es Laktose nicht vergären nicht.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser

4. Phenylethylalkohol Agar:

Phenylethylalkohol (PEA) Agar mit oder ohne 5% Schafsblut ist ein selektives Medium für die Isolierung von gram-positive Organismen, insbesondere grampositiven Kokken, aus Proben von gemischtem gram-positive und gram-negative Flora.

Komponente:

  • Phenylethylalkohol — Hemmt das Wachstum von Gram-Negativen, da sie selektiv und reversibel die DNA-Synthese hemmt, also für Gram positive auswählen.

Abbildung 4: Unbeimpft PEA Agar

Formel:-

Zutaten pro Liter VE-Wasser

5. Hektoen Enteric (HE) Agar:

Hektoen Enteric (HE) Agar ist ein mäßig selektives Medium in qualitativen Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von gramnegativen magensaftresistenten Mikroorganismen eingesetzt, vor allem Shigella und Salmonellen aus einer Vielzahl von klinischen und nicht-klinischen Proben.

Komponenten:

  • Gallensalz. Hemmt das Wachstum der meisten Gram-positive Organismen.
  • Bromthymolblau und Säurefuchsin Farbstoffe. haben eine geringere Toxizität als bei vielen anderen darmlöslichen Medien, zu einer verbesserten Erholung führt.
  • Lactose, Saccharose und Salicin. liefern fermentierbaren Kohlenhydraten, das Wachstum und die Differenzierung von enterischen Spezies zu fördern.
  • Natriumthiosulfat. stellt eine Quelle für Schwefel.
  • Eisenammoniumcitrat. stellt eine Quelle von Eisen, die die Produktion von Schwefelwasserstoff aus Natriumthiosulfat ermöglicht, die eine Schwefelquelle enthält. Dies ermöglicht auch die Visualisierung von Schwefelwasserstoff-Produktion durch mit Schwefelwasserstoffgas Umsetzen eines schwarzen Niederschlag zu bilden.

Abbildung 5: nicht geimpfte Hektoen Enteric Agar Platte

Coliforme Keime in der Lage, die mäßig hemmende Eigenschaften der Medien zu überwinden wird in orange oder lachsrosa Kolonien in Gegenwart des Bromthymolblau Indikator zu entwickeln. Shigella Arten entwickeln sich zu grün-gefärbte Kolonien mit dunkleren blau-grünen Zentren. Salmonellen Arten werden als blau-grüne Kolonien mit oder ohne schwarzen Zentren. Hersteller von H2 S wird Kolonien schwarz-zentriert in der Gegenwart des Eisenammoniumcitrat Indikator bilden.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser

6. Blut-Agar:

Blut-Agar ist sowohl Differential und angereicherte Medium. Das Blut, das in dieses Medium eingebracht wird, ist eine Bereicherung Bestandteil für die Kultivierung von anspruchsvollen Organismen wie die Streptokokkus Spezies.

Eine Reihe von Streptokokken-Arten produzieren Substanzen, die roten Blutkörperchen zerstören; das heißt, sie bewirken eine Lyse der roten Zellwand mit nachfolgender Freisetzung von Hämoglobin. Solche Substanzen werden als Hämolysine bezeichnet. Die Aktivität von Streptokokken-Hämolysin auch als streptolysins bekannt leicht beobachtet werden kann, wenn die Organismen auf einem Blut-Agar-Platte wachsen.

Anders Streptokokken produzieren verschiedene Auswirkungen auf die roten Blutkörperchen im Blut Agar. Diejenigen, die unvollständige Hämolyse produzieren und nur teilweise Zerstörung der Zellen um Kolonien werden alpha-hämolytische genannt Streptokokken. Bezeichnenderweise wird diese Art von Hämolyse als eigenständige Begrünung des Agars in der hämolytischen Zone gesehen, und somit diese Gruppe von streptoc occi hat auch als viridans Gruppe bezeichnet.

Arten, deren Haemolysinen verursachen eine vollständige Zerstörung der roten Blutkörperchen in den Agar-Zonen ihre Kolonien umgeben, werden gesagt, dass beta-hämolytisch. Beim Anbau auf Blut-Agar, Beta-hämolytische Streptokokken sind kleine undurchsichtige oder halbdurchscheinend Kolonien durch klare Zonen in einem roten undurchsichtigen Medium umgeben. Zwei Arten von beta Lysine hergestellt: Streptolysin O und S. Streptolysin Streptolysin O, die ein antigenes, sauerstofflabilen Enzym und Streptolysin S, eine antigen, Sauerstoff stabile lysin. Die hämolytische Reaktion verbessert wird, wenn Blutagarplatten ausgestrichen werden und gleichzeitig von Streptolysin O in einer Umgebung mit vermindertem Sauerstoffspannung zu zeigen, unter der Oberfläche Hämolyse gestochen. Einige Stämme von Staphylokokken , Escherichia coli. und andere Bakterien können auch beta-Hämolyse zeigen.

Einige Arten von Streptokokken nicht produzieren Haemolysinen. Daher wird, wenn die Kolonien auf Blutagar wachsen, wird keine Veränderung in den roten Blutkörperchen um sie zu sehen. Diese Arten werden als nicht-hämolytischen oder gamma hämolysierende Streptokokken bezeichnet.

Auf Blut-Agar, S. aureus zeigt in der Regel ein Licht golden gelbes Pigment, während S. epidermidis hat ein weißes Pigment und S.saprophyticus entweder ein helles gelbes oder weißes Pigment. Jedoch ist die Pigmentierung nicht immer ein zuverlässiger charakteristisch. Auf Blut-Agar, S.aureus gewöhnlich, aber nicht immer, beta-hämolytisch; S. epidermidis und S. saprophyticus fast immer nicht hämolytisch sind.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser

Anmerkung: Man löst die obigen Bestandteile und Autoklaven. Kühlen Sie die sterile Blutagarbasis auf 45 ° bis 50 ° C und aseptisch 50 ml steriler, defibriniert Blut. Gut mischen und dann verzichtet werden in Platten während einer Flüssigkeit. Blutagarbasis für die Verwendung bei der Herstellung von Blut-Agar können auch gekauft werden. Eine Kombination aus Hämoglobin und einem kommerziellen Nahrungsergänzungsmittel kann anstelle von defibriniertem Blut verwendet werden.

7.Chocolate Agar:

Anspruchsvolle Organismen wie Haemophilus und Neisseria erfordern speziell Kulturmedien und microaerophilic Inkubationsbedingungen angereichert. «Chocolate» Agar wird für die primäre Isolierung von Haemophilus aus klinischen Proben verwendet. Dieses Medium enthält Hämoglobin aus roten Rinderblutzellen abgeleitet sind, sowie andere Faktoren Anreicherungs Wachstum. Schokoladen-Agar kann selektiv gemacht werden für Haemophilus Spezies, die durch den Zusatz von Bacitracin.

Abbildung 7: unbeimpfte Schokoladen-Agar-Platte

Zwei spezielle Wachstumsfaktoren, genannt X und V, werden von einigen erforderlich Haemophilus Spezies. Der X-Faktor ist Hämin, ein hitzestabiles Derivat von Hämoglobin. Die roten Blutzellen in der Schokolade-Agar wurden erhitzt, bis sie lysiert werden und die eine charakteristische braune Farbe dieses Medium zu erzeugen.

Lyse das Blut mit Wärme löst den X-Faktor, die sonst isn t in regelmäßigen Blutagarplatten. Aus diesem Grund Schokolade-Agar ist das Medium der Wahl für die Kultur Haemophilus influenzae.

Der V-Faktor ist ein hitzelabiles Coenzym (Nicotinamidadenindinucleotid oder NAD), essentielle im Metabolismus von einigen Arten, die es fehlt. Hefeextrakte enthalten V-Faktor und sind eine der besten Ergänzungen von Schokolade-Agar oder andere Medien verwendet für Haemophilus.
Schokoladen-Agar, jedoch nicht offenbaren Hämolyse Daten, so Speziesdifferenzierung zwischen den Mitgliedern Haemophilus muß in einer anderen Weise durchgeführt werden.

Formel:

Zutaten pro Liter VE-Wasser.

Hinweis: Aseptisch 5% steril, defibriniert Schafsblut in den sterilen und geschmolzenen Agar. Hitze bei 80 ° C für 15 Minuten oder bis eine Schokolade Farbe entwickelt.

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